梅毒防控重在检测策略 电化学发光法成主流

梅毒是由梅毒螺旋体感染引起的一种慢性、系统性的性传播疾病,传播途径多、传染性强,对社会和人类健康造成巨大危害。据国家卫生计生委疾病预防控制局发布的《2016年全国法定传染病疫情概况》,2016年我国梅毒报告发病数居传染病类第三位,逾43万例,发病率高达31.967/10万。

日前,在西安举办的“2017中国医师协会检验医师年会暨第十二届全国检验与临床学术会议”上,四川大学华西医院实验医学科陶传敏教授分享了国际权威梅毒管理指南及国内外大型研究对于梅毒实验室检测方法和标准检测流程的临床应用评估及推荐,就梅毒感染的实验室检测策略及不同流程的应用进行了深入分析与探讨。

由于梅毒临床表现复杂多样,症状可能与其它疾病相似,临床诊疗难度很大,准确、可靠、高效的检测策略和方法是实现梅毒早期诊断和鉴别诊断的关键。实验室亟需进一步提高梅毒检测水平,以期更好地指导临床、有效控制梅毒传播。”

梅毒感染实验室检测 首选特异性检测方法

梅毒实验室检测方法主要分成三大类:病原体检测、核酸检测和血清学检测。病原体检测主要是用暗视野显微镜和镀银染色,方法繁琐不适合实验室常规检测;而核酸方法和病原体检测都受病原体在局部的影响,容易发生漏检。因此,血清学检测是实验室诊断梅毒的主要手段。

血清学检测包括非梅毒螺旋体抗原试验(NTT)和梅毒螺旋体抗原试验(TT)。前者属于非特异性抗体检测,主要包括性病研究实验室试验(VDRL)、快速血浆反应素试验(RPR)和甲苯胺红不加热血清试验(TRUST),这可能会在自身免疫性疾病患者或孕妇中呈假阳性以及在晚期患者中呈假阴性。后者属于特异性检测,主要包括梅毒螺旋体血凝试验/梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPHA/TPPA)、酶联免疫吸附试验(ELISA/EIA)、化学发光免疫分析法(CLIA/CIA)等,这类方法检测的是梅毒螺旋体特异性抗体,特异性及敏感度均较高。

梅毒实验室检测流程主要包括传统检测流程和反向检测流程,两者的区别在于采用哪一种方法作为初筛的检测手段。传统检测流程是先进行NTT,结果阳性的患者再进行TT,结果阳性确认新感染或曾经治疗过;反向检测流程反之,对于TT结果阳性的患者进行NTT,若结果阴性再进行第二种TT检测,结果阳性则表示近期再次感染或曾经治疗过。现在还有一种是欧洲疾病预防控制中心(ECDC)流程,这是一个更简化的反向流程,先进行TT,结果阳性的患者直接再进行第二种TT检测。

目前,对于梅毒的实验室筛查与诊断流程,越来越多地倾向于用反向检测流程。美国疾病控制中心发布的《2015性传播疾病治疗指南》提出反向流程对患者诊断更为全面,能够检测出既往治疗过、未治疗或不完全治疗的梅毒患者,以及低感染率人群的假阳性情况。《2014欧洲梅毒管理指南》推荐TT作为单独的初筛方法,并应采用全自动EIA/CIA,NTT只能检测到现症梅毒,相比TT会漏检很早期的梅毒感染。《2015英国梅毒管理指南》也推荐EIA/CLIA作为初筛方法,同时检测免疫球蛋白M(IgM)和免疫球蛋白G(IgG),并特别提到初筛阳性后再用另一种TT方法进行确认。

陶传敏教授指出:“我国现在绝大部分实验室和血站主要是用反向检测流程,用特异性抗体首先开始进行筛查,对于筛查阳性的患者建议做非特异性检测,同时结合临床表现和流行病学史进行诊断。对性病门诊患者没有必要区分反向流程和传统流程,应该建议患者同时做这两类不同的实验室检测,这样可以节约时间。”

电化学发光检测方法 有效提高梅毒检测质量

梅毒螺旋体抗原极不稳定,试剂性能的优异取决于更高的设计标准。对于免疫试剂的设计,抗原的筛选和制备工艺需要非常考究。罗氏诊断对抗原组合进行严格筛选和评估,最终选取了最有优势的抗原成分进行重组;同时优化了抗原序列,以实现试剂的稳定性和特异性,并采用了易大规模生产的高可溶性抗原,配合罗氏专有的解决方案,即抗原伴侣的应用,与天然抗原极度接近的表位的表达,实现只与抗原伴侣结合,不和特异性抗体结合,从而降低假阳性率。罗氏诊断Elecsys® Syphilis梅毒螺旋体抗原特异性抗体电化学发光检测试剂盒于 2014 年 8 月正式在中国获批上市。该技术使用双抗原夹心法(DAGS)检测梅毒螺旋体总抗体,血清样本仅需10μL,在18分钟时间内即可完成整个检测过程,是目前可靠、高效的梅毒特异性检测方法。

2015年,Clinical and Vaccine Immunology杂志发表了一项由全球6个国家8家研究中心参与的梅毒检测国际多中心研究结果,四川大学华西医院成为唯一一个中国中心,参加了欧洲同步的性能评估。结果显示:与其它方法学梅毒检测试剂相比,罗氏诊断Elecsys® Syphilis梅毒螺旋体抗体检测在灵敏度、特异性、临床样本敏感性等综合性能表现最佳,并且可100%检测出不同分期梅毒感染样本。

2016年,微生物学领域经典期刊Journal of Clinical Microbiology杂志发表了一项对六种自动化梅毒螺旋体抗体检测方法的比较研究结果,对比其它方法学梅毒检测试剂,Elecsys® Syphilis梅毒螺旋体抗体检测的敏感性、特异性和一致性表现优异,其中,敏感性达到99.4%,特异性达到100%,一致性是99.8%,无一例假阳性结果和漏检情况发生。

陶教授指出:“临床上有一些潜在因素,如合并其它传染病、自身免疫性疾病、肿瘤、妊娠等,可能会干扰到梅毒的实验室检测结果,因此,选择抗干扰能力强的检测方法对于检测结果的准确性至关重要。”Elecsys® Syphilis梅毒螺旋体抗体检测采用抗干扰模式,可有效避免交叉反应,针对干扰样本的评估研究显示,具有极佳的特异性与灵敏度,对人类免疫缺陷病毒感染、EB病毒(EBV)感染和莱姆病(Lyme)的特异性均达到100%。

为提供更具参考性的中国证据及使用经验,四川大学华西医院联合全国其它14家医院共同开展了“罗氏诊断新一代Elecsys® Syphilis梅毒螺旋体抗体检测试剂性能比对多中心研究”,旨在自然条件下比较Elecsys® Syphilis检测试剂与已在国内上市的其它四种梅毒检测试剂的灵敏性与特异性。共纳入13,767例常规随机样本,是全球样本最多的试验之一。该研究结果表明,Elecsys® Syphilis在所有比对组常规随机样本中的敏感度均达到100%,特异性也更优异;Elecsys® Syphilis在所有比对组“临界”样本中的假阳性和假阴性结果更少。